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产品描述：

XYIzol Reagent是一种即用型且操作迅捷的总RNA抽提试剂，适用样本广泛，包括人、动物、植物、酵母或细菌来源的细胞和组织样本。本品是一种含酚、异硫青酸胍和其他专利成分的单相溶液，有利于抽提分子量大小不一的各种RNA类型。能够良好的维持RNA完整性，因能高效抑制样本匀浆过程中细胞破损和细胞组分溶解时释放的RNase活性。XYIzol Reagent能够同时处理大量样本，且以优化的方式一步法提取RNA，整个过程可在一小时内完成。

分离的总RNA无蛋白质和DNA污染，适用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、poly(A）+筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等下游实验。

使用说明：

1、需自行准备的材料

水浴锅

异丙醇

75%乙醇

含0.5%SDS的RNase-free水或DEPC处理水（可选：RNase-free的糖原）

2、样品的制备

当样品富含蛋白质，脂肪，多糖或是细胞外物质例如肌肉，脂肪组织和植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在2—8°C的条件下以12,000×g的离心力离心10分钟，移除匀浆中不溶解的物质，余下的沉淀中包含有细胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，而上层的超浮游物含有RNA。在来自于脂肪组织的样品中，大量的脂肪漂在最上层因而应该除掉。在每一个个案中，将清亮的匀浆溶液转移到一干净的试管中加入氯仿并继续进行下述的分离步骤。

3、分离阶段

将匀浆样品在15—30°C条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。每1 ml XYIZOL加0.2 ml氯仿。盖紧样品管盖，用手用力摇晃试管15秒并将其在30°C下孵育2—3分钟。在2—8°C下以不超过12,000×g的离心力高速冷冻离心15分钟。离心后混合物分成三层：下层红色的苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加XYIZOL容量的60%。

4、 RNA的沉淀

将水样层转移到一干净的试管中，如果希望分离DNA和蛋白，有机层同样要予以保留。通过将水样层和异丙醇混合来沉淀RNA。最初均化时的每1 ml XYIZOL对应0.5 ml异丙醇。将混合的样品在15—30°C条件下孵育10分钟并在2—8°C下以不超过12,000×g的离心力高速冷冻离心10分钟。RNA沉淀在离心前通常不可见，形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。

5、RNA的洗脱

移去上层悬液。用75%的乙醇洗涤RNA沉淀一次，每1 ml的 XYIZOL至少加1 ml的75%乙醇。旋涡振荡混合样品并在2—8°C下以不超过7,500×g的离心力高速冷冻离心5分钟。

6、RNA的再溶解

在操作的最后，简单干燥RNA沉淀（空气干燥或真空干燥5—10分钟）不要在真空管里离心干燥RNA。尤为重要的是，不能让RNA沉淀完全干燥那样会极大地降低它的可溶性。部分溶解的RNA样品其A260/280比值< 1.6。用移液管尖分几次移取无RNA酶的水或0.5% SDS溶液来溶解RNA，并在55—60°C下孵育10分钟（当RNA以后要用于酶切反应时，避免使用SDS。）RNA还能被100%甲酰胺（除去离子）再溶解并保存在–70°C。

注意事项：

1）所有离心管、枪头以及相关溶液都必须无RNase污染。对于塑料制品、玻璃和金属器皿、实验仪器等可使用懋康生物的固相RNase清除剂去除RNase，或者用含0.01%DEPC的去离子水浸泡过夜，之后高压灭菌、烘干。对于实验溶液可使用懋康生物的液相RNase清除剂来处理或用DEPC处理水来配制。

2）对新鲜组织或细胞样本的抽提效果通常优于冻存的组织或细胞，由于组织或细胞冻融过程中可能存在一些RNase释放出来并酶切样品。若是不能及时抽提RNA，推荐先加入适量XYIzol Reagent，之后裂解样品后再冻存。

3）XYIzol Reagent含有毒物质，请在操作过程中注意好防护工作，戴好手套和护眼罩，避免皮肤接触。在通风橱内完成操作，避免呼吸道吸入。

4）保存：2-8℃保存，有效期一年

5）运输：冰袋运输

本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断应用或其他用途。