订购信息：

参数说明：

使用说明：

1、用途及使用方法

1）用途：IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性，当pUC系列的载体DNA（或其他带有lacZ 基因载体DNA）以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时，如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互补性，可以根据是否呈现白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑选出基因重组体。此外，它还可以作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。

2）使用方法：首先把IPTG配制成23.83 mg/ml（100 mM）的水溶液，并进行过滤除菌后保存。然后在100 ml的琼脂培养基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal（20 mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100 μl的Amp（100 mg/ml），制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基。

当DNA片段插入至pUC系列载体（或其他带有lacZ、Amp基因载体），然后转化至lacZ缺失细胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基，可根据长出菌体的蓝白色，而方便地挑选出基因重组体（白色为具有DNA插入片段的基因重组体）。

2 、储存液配制

1）称取2.383 g IPTG；加入10 mL去离子水充分溶解IPTG粉末，配制1 M的储存液；

2）用5-10 mL去离子水润湿0.22 μm针孔过滤；

3）0.22 μm滤膜除菌上述IPTG溶液。分装成1 mL，-20℃冻存，有效期可达1年。

3、蓝白斑筛选

1. X-Gal、IPTG 加入琼脂培养基溶液

1）高压灭菌已加琼脂的培养基，并冷却到50℃左右。

2）每毫升培养基内加入10 μL 20 mg/mL X-gal 溶液、10 μL 0.1 M的IPTG（使其终浓度达到1 mM）；

3）加入适量抗生素；

4）混匀后按照平板大小倒入适量培养基，待培养基冷却至室温后，接种细菌于37℃过夜培养。

2. X-Gal、IPTG加到琼脂平板表面

1）于无菌超净工作台制备平板（如LB 琼脂板）；

2）取40 μL 100 mM IPTG和120 μL 20 mg/mL X-gal混合，均匀地涂布于准备好的平板上；
    注：平板边缘较难充分涂布均匀，容易产生假阳性，因此，为了得到更好结果，建议后续操作中尽可能在平板中间挑取单克隆。

3）37℃孵育直至所有液体被吸收（30 min或更长）。接种细菌于37℃过夜培养。

4、诱导原理：

首先：E.coli的乳糖操纵子（元）含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、渗透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节 基因I。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子（元）受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解（代谢）物基因激 活蛋白（CAP）结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物的协调表达 。

其次：在没有乳糖存在时，lac操纵子（元）处于阻遏状态。此时，I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合，抑制转录启动。当有乳糖存在时，lac操纵子（元）即可被诱导。在这个操纵子（元）体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经β-半乳糖苷酶催化，转变为异乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的作用与异乳糖相同，是一 种作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。

注意事项：

1）运输：冰袋运输

2）保存：-20℃保存，有效期5年。

本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断应用或其他用途。