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基本介绍：

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP),中文名10-乙酰基3,7-羟基吩嗦，以商标名Amplex⑧Red在市场上销售。ADHP是一种高度灵敏和稳定的过氧化物酶底物，选择性检测过氧化氢(H2O2)。存在辣根过氧化物酶(HRP)的体系中，这一基本无色和非荧光的ADHP与H2O2以1: 1的化学定量比反应，生成强红色荧光的试卤灵(Resorufin) (Ex/Em= 571/585nm)，可通过荧光光度计和酶标仪分析结果。许多酶反应能产生H2O2,因此，ADHP能够用在偶联酶促反应中检测许多不同酶的生物活性。

工作原理：

使用ADHP进行偶联酶促反应的工作原理。萄萄糖氧化酶催化萄萄糖氧化生成过氧化氢(H2O2) , 通过辣根过氧化物酶(HRP) 催化ADHP反应生成强荧光试卤灵(Resorufin)。

产品应用：10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)是目前为止非常灵敏和稳定的荧光探针用来检测HRP和H2O2。

A)  ADHP普遍用来检测许多免疫实验中的HRP;

B)  ADHP用来检测微量的H2O2;

ADHP的应用实例:

      文献来源: Summers FA et al. Photooxidation of Amplex Red to resorufin: implications of exposing the Amplex Red assay to light. Methods Enzymol.2013;526:1-17.

实验1) Amplex Red Assay

      Reactions containing 50 μM Amplex Red reagent, 0.1 U/mL HRP, H2O2 and 0.5 U/mL catalase in 50 mM sodium phosphate buffer, pH 7.4, as indicatedin the figure legends, were prepared in a darkroom under a red light. White ELISA plates containing the samples (100 uL/wel) in triplicate were eitherkept in the dark for 30 and 60 min or under ambient laboratory light. The fluorescence (excitation 535 nm, emission 595 nm) was measured on a GENiosplatereader (Tecan, Durham, NC, USA).

实验2) Cell Culture Assay

      HaCaT keratinocytes were incubated with 50 μM Amplex Red in PBS for 1 h at 37°C in the dark, then cells were iradiated using UVA (315- 400 nm) fromfour fluorescent PUVA lamps (Houvalite F20T12BL-HO; National Biological Co, Twinsburg, OH) for 15 minutes (3.75 J/cm2) and 30 minutes (7.5 J/cm2).Control cells were treated with the same conditions. After exposure, the fluorescence (excitation 535 nm, emission 595 nm) was recorded using a platereader.

注意事项：

1）ADHP的使用比较方便, 可配制10-20mM DMSO储存液，之后用反应缓中液比如PBS, Tris buffer稀释到50-200μM工作浓度用于检测。最佳的工作浓度需根据自身实验需求进行优化。

2) Amplex⑧Red是 Life Technologies公司的注册商标名。

3) 为了您的安全和健康，请穿实验服并载一次性手套操作。

本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断应用或其他用途。