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7-羟基香豆素-3-羧酸琥珀酰亚胺酯(7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic acid, succinimidyl ester) 是7羟基香豆素3-羧酸(7-OHCCA) 的胺反应琥珀酰亚胺酯，是用来标记蛋白和核酸的一种蓝色荧光染料。这一香豆素的衍生物也越来越多的被用来标记多肽、核苷酸和碳水化合物。

NHS酯标记氨基生物分子的通用步骤，仅作参考：

1. 计算NHS酯的所需量;

2. 确定反应体系的体积;

3. 用DMSO或DMF溶解NHS酯。

[注意:低温保存的NHS酯一定要提前取出回至室温，低速离心后，再开盖使用。NHS酯固体-定要用高质量的无水有机溶剂溶解，配制成合适浓度母液，尽量现配现用，或根据单次用量分装，置于-20°C干燥冻存， 避免反复冻融。]

4.  用pH 8.3-8.5的缓冲液溶解生物分子。

1) 可用0.1M NaHCO3或0.1M磷酸缓冲液。注意pH是最重要的事。且避免缓冲液内含胺类物质，比如Tris, 甘氨酸，铵离子,或稳定蛋白比如BSA。如果缓冲液内含胺类物质，可先透析到10-20mM PBS。然后按照1ml生物分子溶液加0.1ml 1M NaHCO得到理想的pH。低浓度叠氮钠(<3 mM)或柳柳汞(<1 mM)不会干扰标记反应。

2）当进入大规模标记(几百mg级别的NHS酯) , 注意由于NHS酯的水解随著时间推移，反应混合物容易发生酸化。监测pH,或之后使用更高浓度的缓冲液。

5. 加NHS酯溶液到生物分子溶液内，轻轻涡旋混匀。冰上过夜或室温至少标记4h。

6. 使用合适方法比如凝胶过滤 (大分子最常用方法)来纯化标记物。沉淀和色诺是其他可选的替代方法。有机杂质(比如N-羟基琥珀酰亚胺，NHS酯,水解过程产生的酸)绝大部分都很容易被分离。对于蛋白和核酸，可用乙醇或丙酮沉淀法。

7. 纯化好的标记分子最好保存于未标记分子的相同溶剂中。为了防止标记分子变性,或延长保存周期，可添加BSA或其他稳定剂。

注意事项：

1. 荧光探针都存在淬灭现象，在保存和使用的过程中都要注意避光

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断应用或其他用途。