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产品描述

链霉蛋白酶E (Pronase E). 来源于灰色链霉菌的一组蛋白酶(Protease from Streptomyces griseus) ,至少包含细胞外丝氨酸蛋白醇在内的三种蛋白酶活性。通常情况，丝氨酸蛋白酶具广谱的底物特异性，通过分子上一一个天冬氨酸，一个组氨酸，和一个丝氨酸组成的活性位点来调控。本酶选择性偏好水解谷氨酸或天冬氨酸羧基形成的肽键，常见的丝氨酸活性位点抑制剂可抑制其活性，如PMSF和DFP。 链霉蛋白酶E (PronaseE) ，还至少包含三种酪蛋白水解活性和一种氨基肽酶活性，这种酪蛋白水解酶分别命名为灰色链霉菌来源蛋白酶A (Streptomyces gniseus Protase A)，蛋白酶B (Streptomyces griseus Protease B)和胰酶(Sreptomyces griseus TIrypsin)。

因此，本制品可用于蛋白的大量或者完全降解，还可用来研究蛋白酶抑制剂，以及热失活动力学。本制品常用于核酸分离步骤，在添加0.2% SDS和10 mM EDTA的体系内孵育0.5-3h即可达到目的。因其比已知的碱性蛋白酶在更高pH环境下，甚至0.2N NaOH溶液中，活性更强，因此非常适合不溶性蛋白的酶解实验，以及蛋白结构分析。另，还可与胶原酶和胰酶联合使用，以消化组织。也可作用纯化糖蛋白生产糖肽。

使用方法

[注意] :本品应用非常广泛，具体的使用方法和工作浓度请根据实验经验或参考文献来调整。

   1. 储存液制备:溶解于去离子水，配制成5-20mg ml的储存液，若用于DNA或RNA分离步骤，建议将溶液56°C加热处理15min,之后37°C孵育1h, 此步骤能促使酶发生自消化，以去除DNase和RNase污染。 之后将储存液分成单次用量，-20°C冻存， 通常情况1年稳定。

   2. DNA分离:直接加入DNA制备体系(含有0.5-1% SDS以打破DNA-蛋白相互作用)，典型工作浓度范围250-500μg蛋白/ml, 于37°C孵育1-4h。 [注意: 建议工作浓度范围在250-2000g/ml,依照具体情况而定]。

   3.蛋白水解:溶解约0.2uM蛋白到0.2ml 50mM碳酸氢铵缓冲液，pH8.0 (或磷酸盐缓冲液，pH7.0) ，之后按照1% (w/w)加入Pronase E,于37°C孵育24h。 根据情况，有可能需要添加4% (w/w)氨肽酶M，并于37°C再孵育18h。

注意事项：

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断应用或其他用途。