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基本描述:

5-氟乳清酸(5-Fluoroorotic Acid, 5-FOA)用于酵母负选择是一种常用的分子遗传筛选方法。酵母菌质粒清除、质粒穿梭、 等位置换和双杂交筛选都会用到5-FOA。5-FOA自身对酵母细胞无毒，但功能型URA3基因能编码表达乳清酸核苷-5'-单磷酸脱羧酶(OMP脱羧酶)，将其转化为有毒形式(如5-氟尿嘧啶)，从而使得酵母细胞无法生长。

因此，在添加尿嘧啶的5-FOA培养基中，携带URA3突变基因的酵母菌能正常生长。5-FOA主要用于融酒酵母Saccharomyces cerevisiae (URA3) 的鉴定和筛选，虽然曾用于其他菌株，包括要酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe (URA4 and URA5)。白色念珠菌Candidaalbicans (URA3)和大肠杆菌E. coli (pyrF) 。酵母双杂交系统中5-FOA的使用允许构建激活结构域杂交文库来鉴定蛋白-蛋白相互作用。

使用方法
一.5-FOA培养基配置方法(以粉末形式)
       1.1配制400ml标准的酵母合成培养基，并加入1g 5-FOA 粉末，充分溶解混匀，0.22μm滤膜过滹除菌。[或者可当高 压灭菌的标准培养基冷却到55°C后再加入1g 5-FOA粉末，然后过滤除菌。]

       1.2高压灭菌琼脂粉/水混合液(浓度为20g/600ml)，使其冷却到55℃

       1.3将温热的5-FOA培养液倒入琼脂粉/水溶液内，搅匀后，倒平板。

二、5-FOA培养基配置方法(以储存液形式)
      2.1取100mg 5-FOA冻干粉，用1ml无水DMSO充分溶解，配制成100mg/ml (100x) 的储存液。短期频繁使用，置于4℃避光保存;长期保存，根据单次用量分装冻存，-20℃保存6个月有效。
      2.2根据实验室认可的方法,配制标准的酵母合成培养基(含琼脂粉)，高压灭菌。放入转子一起灭菌以便后续搅匀组分用。

2.3冷却到55℃后加入任何热敏感组分(氨基酸，糖类或者其他成分) .

2.4每升培养基加10ml 100x 5-FOA储存液，混匀后，倒平板。

注意事项：

1、5-FOA微溶于水，粉末溶解过程中可加热(如55-65℃) 助溶30min~1h直至完全溶解。5-FOA极易溶于DMSO,但高浓度DMSO对细胞有毒，需注意控制DMSO的终浓度。
     2、5-FOA培养基不用调节pH。
     3、5- FOA培养基平板置于4℃避光保存，可存放3个月，建议用封口膜封口四周

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断应用或其他用途。