订购信息：
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目录号 |
产品名称 |
规格 |
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X13134 |
PEI 40K Transfection Reagent 线性化聚乙烯亚胺转染试剂 |
1ml |
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X13135 |
PEI 40K Transfection Reagent 线性化聚乙烯亚胺转染试剂 |
10ml |
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X13136 |
PEI 40K Transfection Reagent 线性化聚乙烯亚胺转染试剂 |
50ml |
特性说明：
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浓度 |
1mg/ml |
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运输条件 |
室温运输 |
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储存条件 |
常温保存，4℃可延长保存，有效期1年 |
产品描述：
线性化聚乙烯亚胺PEI 40000 (Polyethylenimine Linear, MW 40000; PEI 40K)是一款优秀和低成本的瞬时性转染试剂。 在HEK293和CHO表达系统中，PEI在宽广的生产规模内(从96孔板到100L生物反应器) 能提供连续性的高基因表达。
作为线性化聚Z烯亚胺PEI25000 (PEI 25K)的升级产品，操作更简单，且具有连续性的更高表达滴度，优势在于: 1) PEI 25K转染溶液通常需几个小时来配置，然而，PEI 40K在2个小时内即可转化为即用型的溶液; 2) PEI 25K含4-11%残留的丙酰基基团，该基团阻止聚合物骨架紧密结合到DNA。然而，PEI 40K完全去丙酰化结构，意味着每个批次保持连续性更高转化效率。
本品是PEI 40K的无菌溶液，浓度为1mg/ml,直接使用即可。1ml本品足以用来转染250μg DNA,或者，6孔板内约做60- 120次转染。
试剂准备:
稀释液准备:用细胞培养级水来制备150mM NaCl (比如: 称取876.6mg高纯NaCI加入80ml细胞培养级水，充分溶解后，定容到100ml,经0.1或0.2μm滤膜过滤除菌。)
[注意] :也可使用商业化的无血清培养基(比如Opti-MEM |)来制备转染复合物。
一、贴壁细胞操作方法
1.1铺板
a) 转染前18-24h进行铺板，调整合适的细胞密度(参考表1)，使其在转染时细胞密度达60-80%.[注意] :高血清水平会抑制转染效率，大多数情况，低血清水平(≤5%) 能产生最高的转染效率。
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表1.不同培养皿的建议接种密度 |
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培养器皿 |
培养表面积 |
接种细胞数 |
培养器皿 |
培养表面积 |
接种细胞数 |
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96孔板 |
0.3（cm2） |
（1.2-2.4）X 104 |
35mm培养皿 |
9.6（cm2） |
（3.5-7.0）X 105 |
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48孔板 |
1.0（cm2） |
（4.0-8.0）X 104 |
60mm培养皿 |
21（cm2） |
（0.9-1.8）X 106 |
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24孔板 |
1.9（cm2） |
（0.8-1.6）X 105 |
100mm培养皿 |
58（cm2） |
（2.2-4.4）X 106 |
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12孔板 |
3.5（cm2） |
（1.5-3.0）X 105 |
T75培养瓶 |
75（cm2） |
（3.0-6.0）X 106 |
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6孔板 |
9.6（cm2） |
（4.0-8.0）X 105 |
T175培养瓶 |
175（cm2） |
（0.7-1.4）X 107 |
1.2转染步骤(以6孔板的单孔为例)
a)转染前1-2h, 每孔替换为3m|含2%血清的新鲜生长培养基。
b)制备PEI 40K-DNA转染复合物(严格按照顺序进行) :①往300μI稀释液内加入2μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀;②往混合物内加入8μIPEI 40K (1mg/ml) (DNA/PEI 40K=1: 4)， 低速涡旋5s;③无菌环境，室温静置20min以形成PEI 40K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次，轻轻混匀。
c)将PEI 40K-DNA转染复合物转到孔内。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋，使得复合物分散均匀。
[注意] :以上步骤可通过调整PEI 40K-DNA复合物在稀释液内的体积(稀释液为培养总体积的10%)来进行放大或缩小(可参考表2)。确保DNA/PEI 40K=1: 4!
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表2.不同培养体系内转染用各组分建议用量 |
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培养器皿 |
培养体积(ml) |
质粒DNA（ug） |
稀释液 |
PEI 40K（ul） |
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6孔板，单孔 |
3 |
2-4 |
0.3 |
8-16 |
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35mm培养皿 |
3 |
2-4 |
0.3 |
8-16 |
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60mm培养皿 |
5 |
6-12 |
0.5 |
24-48 |
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100mm培养皿 |
10 |
12-24 |
1.0 |
48-96 |
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T75培养瓶 |
15 |
18-36 |
1.5 |
72-144 |
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250ml摇瓶 |
50 |
50-100 |
2.5 |
200-400 |
1.3孵育
a) 37°C, 5% CO2培养箱内培养细胞，转染后12-18h,去除含PEI 40K-DNA复台物的培养液，更换新鲜的生长培养基。
b) 通常，转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。
二、悬浮细胞操作方法
2.1接种准备
于转染前2-3h,按照1 .0x 106/ml培养接种细胞。
2.2转染步骤(以: 50ml培养物/250ml摇瓶为例)
a)制备PEI 40K-DNA转染复合物(严格按照顺序进行) :①往2.5ml稀释液内加入50μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀;②往混合物内加入200μl PEI 40K (1mg/ml) (DNA/PEI 40K=1: 4)，低速涡旋5s;③无菌环境，室温静置20min以形成PEI 40K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次，轻轻混匀。
b)将全部转染溶液加入25ml悬浮细胞内。
c)将悬浮细胞放回培养箱内。
2.3孵育
a)在培养箱内摇动培养2-3h,之后加入25ml新鲜生长培养基。重新放回培养箱。
b)通常,转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。
注意事项：
1) 请务必使用高质量的无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度, 260nm/280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8 ~ 2.0的范围之内)。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。
2)使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。
3)对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞， 在转染前两天铺板可显著提高重组蛋白的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为60-80%。
4)对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。
5)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断应用或其他用途。
