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胰蛋白酶(胰酶，Trypsin)，CAS: 9002-07-7. 来源于胰腺的一种丝氨酸蛋白酶，由223个氨基酸残基组成的单链多肽，底物特异性是带正电荷的赖氨酸和精氨酸侧链。胰酶主要切割赖氨酸和精氨酸羧基端，当两者之一紧随为脯氨酸的情况除外。 另外，当切割位点任一边紧邻酸性残基， 胰酶水解速率也会减缓。

胰蛋白酶(胰酶，Trypsin)。以无活性的胰蛋白酶原(Trypsinogen) 形式分泌于胰腺中，通过切割其末端六肽而得到活化，产生天然单链形式的β-胰酶(β-Trypsin)，随后进行有限的自发裂解产生具水解活性的α-Trypsin (由二硫键共价连接的二条肽链组成)。胰酶水解活性可被多种化合物所抑制，有1)来源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制剂; 2)银离子; 3)有机磷化合物，如氟磷酸异丙酯DFP; 4)特定蛋白酶抑制剂，如AEBSF、抗蛋白酶、 抑肽酶、PMSF、TLCK等;

本品是来源于猪胰腺的胰蛋白酶冻干粉，经γ射线处理灭活病毒,经过猪细小病毒和支原体检测。基于标准测定方法的酶活力为250 units/mg，即1:250。 广泛用于细胞传代，对贴壁细胞进行消化以制备单细胞悬液，常用的工作浓度是0.025-0.5% (w/v) 。也可联合其他蛋白酶如胶原酶、弹性蛋白酶一起使用， 以消化组织。

使用方法：

1.胰酶储存液(2.5%，w/v) 的配制

1.1称取2.5g胰酶粉末溶于100mI不含钙镁的平衡盐缓冲液，如HBSS (Hank's Balanced Salt Solution)。并调整pH在7.4-7.6.此时得到的即2.5%胰酶储存液，置于4°C短时间保存，3个月相对稳定。建议分装冻存，利于长期保存。解冻后可能会出现少量沉淀，属于正常现象，不会影响使用效力。

1.2细胞的消化可以直接用胰酶溶液，但常使用胰酶-EDTA溶液，因为EDTA是一种II价金属离子螯合剂，能够螫合钙镁离子，减少细胞间的粘附性，从而增强胰酶活性。

[注①] :胰酶用于细胞传代的工作浓度范围为0.025%-0.5%，具体浓度的选择主要受胰酶活性、孵育时间和细胞系类型几个方面影响。若用过高浓度消化过长时间，会破坏细胞膜结构，进而杀死细胞。当对使用浓度把握不大，建议先使用低浓度消化，慢慢的摸索出合适的工作浓度。

[注②] :胰酶-EDTA溶液的配制(仅作参考，根据需要的实际胰酶浓度来调整)

无Ca2+. Mg2+及酚红的平衡盐溶液485ml

胰酶储存液(2.5%， w/v)     10 ml

EDTA溶液(2%，w/v)        5ml

2.贴壁细胞消化(培养板)

2.1吸掉培养板内培养液，用不含Ca2+/Mg2+的缓冲液清洗单层贴壁细胞，直至清除残余血清,吸掉盐溶液。

2.2向上述贴壁细胞中加入适量胰酶溶液或者胰酶-EDTA溶液，完全覆盖细胞即可。此时将细胞置于37°C培养箱孵育2min左右

2.3立即取出，倾斜培养板，吸掉胰酶或者胰酶-EDTA溶液，轻拍培养板，观察细胞的消化状态。若消化不够，可放回37℃培养箱短时孵育，直至细胞从表面脱落。整个消化过程可通过倒置显微镜来观察。

[注①] :消化时间跟细胞类型、细胞密度、培养液内血清浓度、胰酶活性、以及消化前细胞培养时间等因素有关。胰酶对细胞的损伤以及消化时间尽量保持在最低水平。

2.4加入含血清的适量培养液到消化好的细胞内，轻轻反复吹吸从而将细胞从培养板底尽可能吹离,以及吹散细胞团，吹洗时尽量避免气泡的产生。

[注①] :血清能抑制进一步的胰酶消化， 保护细胞不被过度消化。当使用无血清培养液，建议此时加入等摩尔的大豆胰酶抑制剂(Soybean trypsin inhibitor) 以起到相同效果。

2.5进行下一步操作[亚培养,或细胞计数]或细胞冻存。

[注①] :操作时务必小心谨慎，同时时刻注意避免交叉污染发生的可能性。

注意事项

1)胰蛋白冻干粉产品常遇到的活性定义及其转换,

1 BAEE Unit:在25℃, pH 7.6的条件下，以BAEE为底物，3.2 ml的反应体系中，A253吸光值每分钟会发生0.001的变化即为一个酶活单位。

1 TAME Unit:在25%C，pH 8.2，0.001M Ca2+条件下，每分钟水解1μmol p-toluenesulfonyl-L-arginine methyl ester (TAME)的用量。

1 USP Unit: 在指定条件下，每分钟引起吸光值发生0.003的变化的样品活性。

1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit

2)为了您的安全和健康，请穿实验服并裁-次性手套操作。

本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断应用或其他用途。